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Universidade Federal de Pernambuco Centro de Ciências Biológicas Genética Molecular Recife-PE 2016 GENOMAS DE BACTÉRIAS Amanda C. de M. Souza amanda.cmsouza@yahoo.com.br Conteúdo a ser abordado Procariotos; Diversidade; Classificação; Características; Genoma Procariótico; Conteúdo GC; Organização do gene. Mais antigos evolutivamente Procariotos Superclado Prokarya Organismos unicelulares Procariotos ou bactérias Bactérias (bactérias “verdadeiras”) água solo patogênicas Arqueobactérias (bactérias “antigas”) - ambientes extremos fontes termais fundo de oceanos vulcões fontes ácidas Procariotos • Diversos nichos ecológicos São mais próximas dos eucariotos! Procariotos • Classificação Taxonômica x Classificação Filogenética Reino Monera Protista Fungi Plantae Animalia Robert Whittaker (1969) – cinco reinos Procariotos • Classificação Taxonômica x Classificação Filogenética Carl Woese (1990) – três domínios Procariotos • Classificação Taxonômica x Classificação Filogenética Cavalier-Smith (1998) – seis reinos Reino Monera Protozoa Fungi Plantae Animalia Chromista Genoma Procariótico Análises genômicas comparativas abrangentes, devido ao número de espécies que vem tendo seus genomas sequenciados Organismos tão ou mais heterogêneos do ponto de vista de suas constituições genéticas do que eucarióticos Genoma Procariótico Genomas procarióticos completamente sequenciados vem crescendo, existindo uma representatividade amostral de todos os filos de bactérias e arqueas. O 1° genoma a ser inteiramente sequenciado (1995) - bactéria patogênica Haemophilus influenzae Genoma Procariótico Procarioto x Eucarioto Genoma Procariótico Células procariontes • Não possui núcleo organizado; • Material genético compactado no nucleoide; • Não possui organelas envoltas por membranas. Genoma Procariótico Única molécula circular de DNA DNA compactado e não se liga a proteínas histonas Outras características BACTÉRIA (Exceções) MOLÉCULAS DE DNA Agrobacterium tumefaciens Linear Brucella melitensis Linear Rhizobium spp. Linear Rhodobacter capsulatus Linear Streptomyces griseus Linear Genoma Procariótico o Evolução e dinâmica do genoma bacteriano Os genomas procarióticos podem variar de tamanho de 150 mil até mais de 13 milhões de pares de bases (pb). O genoma bacteriano tem capacidade de sofrer mudanças, embora se mantenha relativamente constante; Tamanho do genoma potencialmente plástico Genoma Procariótico o Evolução e dinâmica do genoma bacteriano Pseudomonas aeruginosa: 4.100 kb a 5.400 kb 5.460 a 5.900 kb 2.200 a 2.800 kb depende da cepa analisada O tamanho do genoma pode variar entre diferentes cepas. Genoma Procariótico o Evolução e dinâmica do genoma bacteriano Quase todo o DNA de bactérias (85 a 90%) codifica para RNA estruturais ou proteínas O tamanho do genoma é proporcional ao nº de genes Genes envolvidos com metabolismo, estrutura celular, transporte, regulação da expressão gênica Conteúdo GC Conteúdo médio de G + C (ou conteúdo de GC) de um genoma: é a fração (porcentagem) de nucleotídeos de guanina e citosina que ele apresenta, que é complementar à fração de nucleotídeos de adenina e timina. GC (%) = (G+C/ A+T+G+C) X 100 Conteúdo GC Espécies parasitas ou simbióticas, que também tendem a ter genomas menores, possuem genomas mais ricos em AT (e pobres em GC), ao passo que as espécies de vida livre tendem a ter genomas maiores e mais ricos em GC. Tendências ou correlações mais marcantes com o conteúdo de GC parecem não estar associadas a grupos taxonômicos específicos Elementos Genéticos Móveis Plasmídeos Transposons Bacteriófagos • Segmentos de DNA Codificam enzimas e outras proteínas; Medeiam a movimentação do DNA dentro de genomas e entre células bacterianas; Elementos Genéticos Móveis • Plasmídeos Moléculas de DNA circulares, independentes do cromossomo bacteriano Elementos Genéticos Móveis 10 a 1000 vezes menores que o cromossomo bacteriano; Não causam danos às células hospedeiras; Se replicam independentemente do cromossomo bacteriano e da divisão da bactéria; Adquiridos através da conjugação bacteriana; “Reservatório extra de genes”; Usados como veículos para clonagem. • Plasmídeos Elementos Genéticos Móveis • Transposons Segmentos lineares de DNA capazes de mudar de posição dentro do genoma • Codificam uma enzima capaz de transportá-los: Transposase; • Possuem sequências similares em ambas extremidades (repetições terminais, geralmente invertidas); Elementos Genéticos Móveis • Transposons Dois métodos de transposição: 1. Mecanismo de “Recortar e colar” 2. Mecanismo de “Copiar e colar” Elementos Genéticos Móveis 1. Transposição conservativa (“recortar e colar”) – transposase quebra a fita de DNA nas extremidades onde estão as repetições terminais e insere o transposon em outro local do genoma. Elementos Genéticos Móveis 2. Transposição replicativa (“copiar e colar”) – transposon movimenta-se através de sua replicação e posterior inserção em outro local do genoma. Pode integrar-se ao cromossomo bacteriano e comportar-se como parte deste sem destruir a célula hospedeira; Transportam genes que codificam fatores de virulência; Bactérias não-patogênicas convertidas em patogênicas após infecção com bacteriófagos específicos (conversão fágica). Elementos Genéticos Móveis • Bacteriófagos Organização do Gene A tradução só ocorre com mRNAs, os quais são transcritos a partir de genes que codificam cadeias polipeptídicas. O sequenciamento de genomas procarióticos não apresenta íntrons e é colinear com os respectivos produtos. Os genes procarióticos variam em tamanho dentro de uma faixa mais restrita do que aquela dos eucarióticos. Como podemos explorar os genomas sequenciados de bactérias? www.ncbi.nlm.nih.gov Explorando Genomas Procariotos NCBI (National Center Biotechnology Information) Explorando Genomas Procariotos Explorando Genomas Procariotos Explorando Genomas Procariotos Explorando Genomas Procariotos • Atualmente: Menor genoma: Nasuia deltocephalinicola Maior genoma: Sorangium cellulosum 112.091 pb 14.782.100 pb Explorando Genomas Procariotos Menor genoma procarioto! Explorando Genomas Procariotos 137 proteínas; 32 RNAs estruturais, distribuídos em 3 rRNA e 29 tRNA 10.515 proteínas; 73 RNAs estruturais, distribuídos em 12 rRNA e 61 tRNA Maior genoma procarioto! Explorando Genomas Procariotos • Conteúdo G-C Menor genoma: Nasuia deltocephalinicola Maior genoma: Sorangium cellulosum Explorando Genomas Procariotos • Bactéria modelo; • Coliformes fecais. Escherichia coli • Quais informações relevantes podemos retirar desta tabela? • Qual a densidade gênica? Clicando aqui... Escherichia coli Escherichia coli Anotação do Gene Visualização dos Códons e Aminoácidos • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ • Genome – Search • Browse by Organism • Prokaryotes • Espécie analisada • Analisar a tabela • Graphics Roteiro de como navegar no NCBI Considerações Finais • Distribuição dos Procariotos (Nichos ecológicos); • Estrutura e Evolução do Genoma; • Elementos genéticos móveis; • NCBI. BRIGADA!