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Diagnóstico Laboratorial de Parasitismo Coletadas preferencialmente do reto e examinadas ainda frescas (Grandes animais). Eliminação espontânea Fezes coletadas do campo ou do chão, o ideal é que a coleta seja realizada apenas se foi observado o momento em que o animal defecou. Auxilio de Luva de plástico para a coleta. Amostras individuais (Pequenos animais) Pelo menos 10 amostras por rebanho (Grandes animais). Aproximadamente 5 g de fezes Armazenamento refrigerado/ agentes químicos: Formalina EXAME DE FEZES MÉTODOS DE EXAME DE FEZES: Classificação Métodos Método Quantitativo: Destinadas não só a detectar a presença de ovos, oocistos. Mas avaliam o número e grau de infecção Método Qualitativo: Destinadas a detectar a presença de ovos, oocistos, larvas independente dos níveis de infestação MÉTODOS DE EXAME DE FEZES Método do esfregaço direto Gotas de Sol. Fisiológica e uma quantidade equivalente de fezes misturadas a uma lâmina de microscópio. Uma lamínula é colocada sobre o líquido e a preparação é então examinada microscopicamente. A- Fazer duas lâminas por amostra B - Adicionar uma gota de solução fisiológica em cada lâmina C - Adicionar uma gota de fezes diarreicas em cada lâmina D - Corar com Lugol uma das lâminas, Cobrir as duas lâminas com lamínulas MÉTODOS DE EXAME DE FEZES: Flutuação Método de flutuação ovos dos parasitas são suspensos em um líquido com densidade maior que aquela dos ovos Ovos flutuarão para a superfície Método do flutuação: Willis-Mollay Flutuação qualitativa ovos/g/fezes Método do flutuação: Gordon e Whitlock modificada- OPG- Flutuação quantitativa ovos/g/fezes Método do centrífugo-flutuação: Faust Centrifugação e Flutuação qualitativa em sulfato de Zinco Método do flutuação: Willis-Mollay Identificação: ovos e larvas de nematódeos, oocistos de protozoário Material: Fezes (2-5g) Solução Hipersaturada de Nacl ou açúcar Peneira ou Gaze Proveta graduada (100ml) Bastão de vidro ou palito de sorvete Copo e pipeta Lâmina e lamínula . Técnica: Pesar as fezes, Homogeneizar a amostra e mistura-las com a sol. Saturada (cerca de 20ml), com auxílio de basta ou palito Filtrar a suspensão de fezes com auxilio de peneira ou gaze Colocar a suspensão de fezes Filtrada em no copo até formar menisco Colocar Lâmina de vidro sobre o copo, com cuidado Deixar em repouso por 15 min. Remover a lâmina, invertendo sua posição rapidamente. Examinar em microscópio em objetiva de 10x Método do flutuação: Gordon e Whitlock modificada- OPG- Identificação: ovos de helmintos/g de fezes Material: •Fezes (Bovinos, equinos e suínos= 4g) (Ovinos e Caprinos= 2g) •Solução Hipersaturada de Nacl ou açúcar (Bovinos, equinos e suínos= 56ml) (Ovinos e Caprinos= 58ml) • Peneira ou Gaze •Proveta graduada (100ml) •Bastão de vidro ou palito de sorvete •Copo e pipeta •Câmara de MacMaster. Método do flutuação: Gordon e Whitlock modificada- OPG- Flutuação quantitativa ovos/g/fezesTécnica: 1. Pesar as fezes e mistura-las com a sol. Saturada, com auxílio de basta ou palito 2. Filtrar a suspensão de fezes com auxilio de peneira ou gaze 3. Homogeneizar o liquido com a pipeta, retirar amostra para preencher cada célula da câmara de MacMaster. Repetir operação até completar ambas laterais da câmara 4. Esperar 2 min. para os ovos flutuarem e observar em microscópio (objetiva de 10x), realizara contagem de cada lado da câmara Calculo de OPG O total de ovos encontrados em ambos os lados da câmara somados deve ser multiplicado x50 para Bovinos equinos e suínos (56ml), –ou- x100 para ovinos e caprinos (58ml) Avaliação nível de infestação: Gordon e Whitlock modificada- OPG- Flutuação quantitativa ovos/g/fezes Avaliação nível de infestação: Gordon e Whitlock modificada- OPG- Flutuação quantitativa ovos/g/fezes Método do flutuação: Faust Identificação: oocistos de protozoário Material: Fezes (2-5g) Água destilada Solução de sulfato de ZINCO Peneira ou Gaze Bastão de vidro ou palito de sorvete Copo Tubo de centrífuga e pipeta Centrífuga Alça de paltina Lâmina e lamínula . Técnica: Pesar as fezes, Homogeneizar a amostra e mistura-las com a água destilada(cerca de 10ml), com auxílio de basta ou palito Filtrar a suspensão de fezes com auxilio de peneira ou gaze em outro copo e com auxílio de pipeta transferir material para tubo centrífuga Centrifugar o filtrado por 1 min a 2.500rpm, descartar sobrenadante e reter o sedimento Adicionar ao sedimento mais 10 ml de água destilada e centrifugar novamente. Repetir processo até clarificar suspensão Adicionar 2-3 ml de Sulfato de Zinco, homogeneizar e completar vol. do tubo Centrifugar por 1 min. a 2.500 rpm e deixar em repouso por 5 min. Com alça de platina coletar película superficial, colocar em lâmina adicionar 1 gota de lugol e cobrir com lamínula. Examinar em microscópio em objetiva de 10x Método do flutuação: Faust Identificação: oocistos de protozoário MÉTODOS DE EXAME DE FEZES: Sedimentação Método de Sedimentação São utilizadas para pesquisa de ovos pesados, como os de alguns gêneros de Trematoda e Cestoda Ovos serão depositados no fundo do recipiente Método do Sedimentação: Hoffman Sedimentação qualitativa ovos/fezes Método do Centrífugo-Sedimentação- Ritchie Centrífugo sedimentação qualitativa ovos/fezes em Formol e Éter Método do Sedimentação: Hoffman Identificação: ovos e Cetódeos e Trmatódeos Material: 2 a 5 g de fezes Solução fisiológica ou água de torneira Lâmina e lamínula Bastão de vidro Peneira •Béquer com capacidade de 250 a 500 mℓ Cálice de sedimentação (300 a 500 mℓ) Pipeta. Técnica: Diluir as fezes em 200 mℓ de solução fisiológica ou água no béquer. Peneirar a suspensão no cálice de sedimentação Deixar em repouso por 15 min Decantar o sobrenadante e adicionar ao sedimento 200 mℓ de solução fisiológica ou água Deixar em repouso por mais 15 min Decantar o líquido sobrenadante Coletar, com uma pipeta, algumas gotas do sedimento Examinar ao microscópio entre lâmina e lamínula em aumento de 10 e 40x Método do Centrífugo-Sedimentação- Ritchie Identificação: ovos e Cetódeos e Trmatódeos Material: 2 a 5 g de fezes Sol. Fisiológica Éter sulfúrico Formol 7,5% Lugol Lâmina e lamínula Bastão de vidro Peneira Tubo de centrífuga Pipeta. Método do Centrífugo-Sedimentação- Ritchie Identificação: ovos e Cetódeos e Trmatódeos Técnica: Parte 1 Diluir as fezes em 10 mℓ de solução fisiológica Peneirar a suspensão e transferir para tubo de centrífuga Centrifugar por 2 min a 2.000rpm Desprezar o sobrenadante e adicionar ao sedimento 10 mℓ de solução fisiológica e repetir etapa anterior Add. ao sedimento 10 ml de formol 7,5% (não deixar ovos de trematódeos flutuarem e repousar por 20 min Técnica: Parte 2 Acrescentar 3 ml de éter sulúrico Centrifugar por 2 min a 2.000rpm Retirar gordura depositada na borda do tubo e desprezar sobrenadante Coletar, com uma pipeta, algumas gotas do sedimento e Add. uma gota de lugol ao sedimento Examinar ao microscópio entre lâmina e lamínula em aumento de 10 e 40x CHAVES DE IDENTIFICAÇÃO DE OVOS MÉTODOS DE EXAME DE FEZES: Recuperação de larvas Usada para a identificação de larvais vivas de nematoides nas fezes e detecção de vermes pulmonares. Método de Recuperação de larvas: Baermann Identificação qualitativa de vermes pulmonares Método Roberts & O’Sullivan- Coprocultura- Identificação qualitativa/quantitativa de Identificação larvas infectantes Método de Recuperação de larvas: Baermann Identificação qualitativa de vermes pulmonares Material: 10g fezes Recipiente cônico Gaze e barbante Palito de sorvete ou churrasco Suporte p/recipiente cônico Pipeta de Pasteur Técnica: Envolver as fezes em gaze e amarrar com barbante Colocar gaze amarrada em palito apoiada em recipiente cônico Acrescentar água morna até o nível da gaze, entrando em contato com fezes Deixar repousar 2-4h (até 12h), com auxilio de pipeta de Pasteur coletar 1ml do sedimento Avaliar material em lâmina e lamínula sob microscopia Método Roberts & O’Sullivan- Coprocultura- Identificação qualitativa/quantitativa de Identificação larvas infectantes Material: • 3-5g fezes • Bastão de vidro ou palito de sorvete • Serragem de madeira ou areia esterilizada • Copo de vidro • Placa de Petri • Pipeta Método Roberts & O’Sullivan- Coprocultura- Identificação qualitativa/quantitativa de Identificação larvas infectantes Técnica: Misturar em um copo as fezes com a areia ou serragem (mistura homogênea e solta) Colocar a mistura no copo. Com um bastão e fazer furo no centro da mistura para promover aeração. Borrifar cultura com água sem umedecer muito Cobrir o copo com a placa de Petri e identifica-lo e colocar um barbante entre a placa e o copo para evitar abafamento. Colocar a cultura em estufa (25-27ºC) durante 7 dias Após 7 dias, Retirar da estufa, acrescentar água até encher o copo Cobrir novamente com placa de petri Inverter a cultura e acrescentar água morna no espaço livre da placa (migração larval) Retirar o líquido da placa Colocar o líquido em tudo de ensaio, guardar em geladeira por 30min- 3 horas para a sedimentação larval CHAVES DE IDENTIFICAÇÃO DE LARVAS DEMAIS MÉTODOS DIAGNÓSTICOS UTILIZADOS NA ROTINA Métodos Exames de pele: Raspados cutâneos/ Imprints/ citologias de pele/ biópsias para identificação de ácaros/ protozoários/ fungos... Exames Hematológicos: Esfregaços com Amostras de sangue ou linfa e colocar ação específica para identificação de protozoários/bactéria/ riquétsias PROCEDIMENTO Selecionar a área desejada (3 regiões diferentes). Add pequena quantidade de óleo mineral nas regiões. Na raspagem, utilize uma lâmina de bisturi nº 10. Mergulhe a parte cortante ou a base da lâmina em óleo mineral. Iniciar a raspagem no sentido à favor do crescimento dos pelos, até exsudação de conteúdo - sangramento peq. quantidade. Interessante pinçar a região com os dedos. Depositar o material sobre a lâmina PROCEDIMENTO: Introduzir o swab do início do canal vertical, prolongando-se até o canal horizontal Realizar movimentos circulares e verticais, para obtenção de uma amostra repleta de celularidade. Transferir a amostra para uma lâmina, apoiando a porção do swab, realizando na sequência movimentos giratórios contínuos, por toda a extensão da mesma. 06/03/2026 06/03/2026 DEMAIS MÉTODOS DIAGNÓSTICOS UTILIZADOS NA ROTINA Métodos Sorológicos/imunológicos: ELISA/RIFI: Avaliação de Antígenos (substancias que são consideradas ''estranhas'' ou invasoras pelo corpo)/ou Anticorpos (defesa produzida pelo hosp.) Identificação de material genético (PCR): Detecção e quantificação de DNA/ RNA de agentes infecciosos. São Sensíveis e específicos e podem ser aplicados a qualquer estágio do ciclo evolutivo do parasita. Demandam de lab. e mão de obra especializada ($) OBRIGADA