TRABALHO TÉCNICAS CITOQUÍMICAS E IMUNOCITOQUÍMICAS

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UNIVERSIDADE DA AMAZÔNIA - UNAMA 
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE- CCBS 
CURSO DE BIOMEDICINA
Antonio Vitor Souza de Oliveira
TRABALHO DE PESQUISA: TÉCNICAS CITOQUÍMICAS E IMUNOCITOQUÍMICAS
Belém - PA
Setembro/2015
UNIVERSIDADE DA AMAZÔNIA - UNAMA 
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE- CCBS 
CURSO DE BIOMEDICINA
Antonio Vitor Souza de Oliveira
TRABALHO DE PESQUISA: TÉCNICAS CITOQUÍMICAS E IMUNOCITOQUÍMICAS
Trabalho de pesquisa sobre Técnicas de Citoquímicas e Imunocitoquímicas, apresentada à disciplina Citologia e Embriologia, ministrada pela Professora Valeria de Albuquerque Oliveira para obtenção parcial da nota referente à 1ª avaliação no curso de Biomedicina da UNAMA.
Belém - PA
Setembro/2015
INTRODUÇÃO 
	O estudo da Citoquímica e Imunocitoquímica se torna parte importantíssima na vida de estudo acadêmica, pois se faz necessária uma profunda compreensão desse conhecimento. Tendo as devidas bases de estudos e técnicas nessa área, podemos desenvolver na vida profissional as técnicas de forma segura e correta, desde que sejam seguidas as normas e condutas éticas
CITOQUÍMICA
	A Citoquímica é uma parte da Biologia Celular (Citologia), que estuda a composição química das células e seus procedimentos biológicos moleculares. A Citoquímica é usada para indicar os métodos que possa identificar e localizar substancias em cortes histológicos ou em células cultivadas. 
	Para identificar as macromoléculas e os compostos químicos das células, a Citoquímica consiste na coloração específica de um material coletado, que reagindo com substâncias especificas, dão origem a produtos corados.
	O estudo da citoquímica demonstra a localização intracelular das diversas substâncias que formam as células, podendo ser observados através da microscopia óptica, onde temos que fazer trabalhos de fixação e coloração do material. Já na microscopia eletrônica devemos dispersar os elétrons no material, ou seja, deve ser elétron-densidade.
COLORAÇÃO DE MATERIAL BIOLÓGICO 
	Semelhante à de Lei de Lamber-Beer, na Citoquímica após a sua coloração as células produzem uma intensidade de cor proporcional na substancia que será estudada, ou seja será possível identificar a quantidade que está sendo analisada na substância.
Abaixo algumas substancias que podem ser identificadas através da Citoquímica.
Íons – Usando reações químicas que produziram produtos insolúveis escuros ou coloridos, poderemos localizar os íons que estão no tecido;
	Na figura abaixo, utilizando o corante Azul da Prússia ou Perls, é possível realizar a identificação de ferro na célula, A reação se processa na interação de íons ferrocianeto com íons férricos no interior da célula, resultando em um produto de cor azul-esverdeado chamado ferrocianeto férrico. Esse corante pode ser aplicado em cortes histológicos, porém sua grande atuação é no aspirado de medula óssea, na identificação do depósito de ferro e ferro sideroblástico.
PROCEDIMENTO: 
1. Desparafinar e hidratar; 
2. Passar em água destilada;
3. Submeter a solução Clorídrico- Ferrocianeto por 1 hora;
4. Enxaguar em água destilada por três vezes;
5. Contra corar pela Safranina por 2 minutos;
6. Passar em água para diferenciar (controle ao microscópio);
7. Desidratar, diafanizar e montar;
RESULTADO: Pigmento Férrico azul 
Polissacarídeos e Oligossacarídeos – A técnica utilizada para evidenciar o polissacarídeo glicogênio na substancia é a reação de ácido período-Schiff (PAS), que se baseia na oxidação pelo ácido periódico, formando resíduos de aldeído. Após a oxidação estes resíduos são, revelados pelo reagente de Schiff, que produz uma coloração púrpura ou magenta nos locais do corte em que há muitos polissacarídeos.
	Na figura abaixo, a reação histoquímica do PAS (ácido periódico + reativo de Schiff), os corpos amiláceos (corpúsculos arredondados, com diâmetro da ordem de 10 a 12 µm) coram-se fortemente em vermelho magenta devido ao alto conteúdo de grupos glicídicos. 
PROCEDIMENTO
Desparafinar e hidratar
Oxidar em Ácido Periódico 	0,5% por 15 minutos
Lavar em água corrente por 	5 minutos e enxaguar na 	água destilada por 3 vezes
Corar em Reativo de Schiff 	por 30 minutos
Lavar em água corrente por 	5 minutos
Contra corar pela 	Hematoxilina de Harris por 5 	segundos
Lavar em água corrente por 						 5 minutos
Desidratar, diafanizar e montar em resina
RESULTADO
Glicogênio, mucina, membrana basal, fungos -  vermelho
IMUNOCITOQUÍMICA
	A imunocitoquímica é metodologia que permite identificar moléculas ou camadas de células por meio de anticorpos. Uma interação altamente especifica entre moléculas é o que ocorre entre uma molécula e um anticorpo. Métodos que usam ante corpos marcados são de grande utilidade para identificar proteínas e glicoproteínas. 
	Em uma reação altamente imunocitoquímica, células em cultura ou um corte de tecidos que supõe conter uma determinada proteína são incubados em uma solução que contém um anticorpo que reconhece esta proteína. O anticorpo se liga especificamente à proteína e sua localização pode então ser evidenciada por microscopia de luz ou eletrônica, dependendo do marcador que foi acoplado ao anticorpo.
	Em uma reação altamente específica, envolve interação entre as moléculas do antígeno e do anticorpo. Geralmente é utilizada para marcação de núcleo. 
	Para serem localizados os anticorpos precisam de marcadores que determinam sua localização que pode ser visto imediatamente essa se denomina como imunocitoquímica direta. 
	Quando se usa um anticorpo secundário para evitar a perda de anticorpos destinados à localização dos antígenos chama-se imunocitoquímica indireta.