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05/06/2024 1 Profa. Mylene de Melo Silva Curso: Medicina – 1ª série Módulo: Concepção e Formação do Ser Humano ESPERMOGRAMA CONCEITO Exame preliminar que fornece informações importantes em relação à espermatogênese e à permeabilidade do sistema reprodutor masculino. ESPERMOGRAMA ASPECTOS TÉCNICOS • Análise dos aspectos macro e microscópicos do sêmen, podendo identificar alterações espermáticas que causam infertilidade. • Para análise da infertilidade, deve ser realizado pelo menos mais dois espermogramas devido à ampla variabilidade individual, num intervalo entre 7 a 90 dias. • Importante realização de outros exames para identificar as causas da alteração, incluindo dosagens hormonais, exames genéticos, ultrassonografia da bolsa escrotal e ressonância magnética da pelve. 05/06/2024 2 ESPERMOGRAMA INDICAÇÕES • Avaliação da fertilidade; • Doação de sêmen; • Tratamentos de reprodução assistida: o Inseminação artificial; o Fertilização in vitro (FIV); • Monitoramento da vasectomia e da correção de varicocele. PRÉ-ANÁLISE ANÁLISE PÓS-ANÁLISE PRÉ-ANÁLISE • Caxumba • Diabetes • Torção dos testículos • Criptorquidia Antecedentes mórbidos • Uso de drogas • Esteroides anabolizantes • Uso de medicamentos • Exposição profissional a substâncias tóxicas, radiação ou altas temperaturas Hábitos e fatores externos • Motivo do exame • Filhos anteriores (quantidade, idade do mais novo) Outras informações • Ejaculação retrógrada • Paraplegia • Doenças reumáticas • Exercícios físicos em excesso • Obesidade e magreza excessiva Anamnese 05/06/2024 3 PRÉ-ANÁLISE Coleta da amostra • Necessária abstinência sexual de 3 a 5 dias (2 a 7 dias). • Não coletar por relação sexual interrompida. • Não utilizar preservativo, lubrificantes, nem saliva. • Não tocar na parte interna do frasco coletor. PRÉ-ANÁLISE Coleta da amostra Expor a glande e manter o prepúcio retraído. Lavar o pênis com água e sabão e enxaguar com água em abundância. Enxugar o pênis com papel toalha ou gaze. Coletar por masturbação, todo o conteúdo, diretamente no coletor Fechar o frasco e encaminhá-lo de imediato ao laboratório. Desprezar a urina no vaso sanitário. 1 2 Lavar as mãos antes do procedimento. 3 4 5 6 7 PRÉ-ANÁLISE 05/06/2024 4 ANÁLISE • Cor • Volume • Odor Macroscópicos • Viscosidade • Consistência • pH Físico-químicos • Morfologia • Contagem • Motilidade • Viabilidade Microscópicos Parâmetros avaliados ANÁLISE • Cor • Volume • Odor Macroscópicos • Viscosidade • Consistência • pH Físico-químicos • Morfologia • Contagem • Motilidade • Viabilidade Microscópicos Parâmetros avaliados COR: • Normal: branco acinzentado opalescente • Amarelo purulento: processos piogênicos agudos • Vermelho: processos hemorrágicos relacionados a problemas de próstata e vesícula seminal ou rompimento de vasos durante a ejaculação • Amarelo intenso: pode ocorrer na icterícia. Macroscópicos A opalescência é proporcional à população celular: na azoospermia o aspecto fica mais translúcido e em alta população celular, fica mais opaco. 05/06/2024 5 VOLUME: • Normospermia (normal): entre 1,5 e 5,0 mL • Hipospermia (diminuído): < 1,5 mL • Hiperespermia (aumentado): > 5,0 mL • Aspermia: ausência de ejaculado. Macroscópicos Composição do sêmen Soma das secreções dos testículos e glândulas anexas, dependendo diretamente da frequência de ejaculações (alta frequência x abstinência). ODOR: • Característico: lembra o odor de água sanitária (hipoclorito de sódio) Macroscópicos Aminas alcalinas como a putrescina, espermina , espermidina e cadaverina são responsáveis pelo cheiro e sabor alcalino do sémen. Têm a função de neutralizar o ambiente ácido do canal vaginal, protegendo os espermatozoides e seu DNA. 05/06/2024 6 ANÁLISE • Cor • Volume • Odor Macroscópicos • pH • Viscosidade • Consistência Físico-químicos • Morfologia • Contagem • Motilidade • Viabilidade Microscópicos Parâmetros avaliados pH: Reflete o balanço entre os valores de pH, principalmente, da secreção vesicular seminal (alcalina) e secreção prostática (ácida). • Normal: ≥ 7,2 (geralmente < 8,0). • Ácido: < 7,0 deficiência de vesículas seminais, ausência de coagulação ou infecção bacteriana. • Alcalino: > 8,0 geralmente não apresentam informação clinicamente útil. Físico-químicos O frasco deve ser mantido bem fechado para evitar contato com o ar, que pode resultar em aumento de pH pela ação da anidrase carbônica. VISCOSIDADE: Depende da ação resultante de coagulação e liquefação; • Normal: a amostra se alongará em filete < 2 cm . • Diminuída: a amostra se desprende da pipeta em gotas ou filetes curtos. • Aumentada: a amostra se alongará em filete > 2 cm (pode resultar em diminuição da motilidade) Físico-químicos Viscosímetro (padrão ouro) ou Teste da pipeta 05/06/2024 7 CONSISTÊNCIA: Após ejaculação, o esperma coagula para facilitar a dispersão dos espermatozoides e protegê-los da acidez vaginal. Em temperatura ambiente, a amostra se liquefaz dentro de 5 a 60 minutos. • Tempo de coagulação normal: imediata. • Coagulação reduzida ou ausente: deficiência de fatores de coagulação das vesículas seminais (agenesia ou obstrução dos ductos). • Tempo de liquefação normal: ≤ 60 minutos. • Liquefação reduzida ou ausente: deficiência de fatores de liquefação (espermolisinas) da próstata (agenesia ou afecções). Físico-químicos Manter a 37ºC em banho-maria ou estufa ANÁLISE • Cor • Volume • Odor Macroscópicos • Viscosidade • Consistência • pH Físico-químicos • Viabilidade ou Vitalidade • Motilidade ou Mobilidade • Morfologia • Contagem (concentração espermática) Microscópicos Parâmetros avaliados VIABILIDADE OU VITALIDADE: Permite avaliar se os espermatozoides imóveis estão vivos, mas incapazes de se mover, ou realmente mortos. A diferenciação é feita com base na exclusão do corante (eosina) pela membrana plasmática intacta dos espermatozoides vivos e a permeabilidade ao corante em espermatozoides mortos. • Espermatozoides móveis: ≥ 40% • Espermatozoides vivos: ≥ 58% Microscópicos Espermatozoides vivos não corados e os mortos, corados em rosa. 05/06/2024 8 MOTILIDADE OU MOBILIDADE: Ideal utilizar câmaras apropriadas, com profundidade conhecida (ex.: Makler®). Geralmente realizada em microscopia óptica comum entre lâmina e lamínula. Análise bastante subjetiva. Correta homogeneização da amostra, análise em, no máximo, 60 minutos após a coleta, e a leitura em, no máximo, 60 segundos após montagem da lâmina. Deve ser realizada em duplicata, avaliando pelo menos 10 campos em aumento de 400 vezes. A discrepância entre as replicatas não deve ultrapassar 10%. Microscópicos MOTILIDADE OU MOBILIDADE: A. Progressivos rápidos: movimentos visíveis da cauda, espermatozoide corta o campo microscópico, sem mudar de direção, de forma rápida). B. Progressivos lentos: progressão lenta ou média para frente. C. Não progressivos: direção indefinida, errático, em círculos. D. Estacionários: imóveis, inviáveis, aderidos ao muco ou mortos. Movimento dos espermatozoides ocorre em espiral, de forma semelhante a um saca-rolha (Gadelha et al, 2020) Atualmente a OMS considera A e B simplesmente como progressivos e sua porcentagem deve ser superior a 32%. MORFOLOGIA ESPERMÁTICA: Parâmetro de extrema importância para avaliação da qualidade e viabilidade dos espermatozoides. Consiste na avaliação da cabeça, peça intermediária e cauda do espermatozoide, por meio de esfregaço corado pelo Papanicolau ou colorações tipo Romanovsky, como Giemsa ou Wright. Microscópicos 05/06/20249 MORFOLOGIA ESPERMÁTICA: O esfregaço deve ser preparado a partir da “papa de sêmen”, após centrifugação da amostra de sêmen com salina estéril na proporção 1:3. Microscópicos O sistema de classificação morfológica recomendado pelo manual da OMS é o é o critério estrito de Tygerberg, descrito em 1986 por Kruger et al., que emprega a análise morfométrica para a determinação do padrão de normalidade. Segmento cefálico com forma oval e lisa, com acrossomo compreendendo de 40% a 70% No espermograma como triagem, a análise deve ser feita em aumento de 400 X e critérios convencionais (aceitam pequenos defeitos); Para clínicas de reprodução, a análise deve ser realizada em aumento de 1000 X e critério estrito de Tygerberg (uso de micrômetro). 05/06/2024 10 CONTAGEM (CONCENTRAÇÃO ESPERMÁTICA): Número de espermatozoides em milhões por mililitro de sêmen (x106 por ml), determinada pela diluição volumétrica associada à hematocitometria Pode ser realizada por meio de contagem em Câmara de Neubauer ou Câmara de Makler. Para contagem em Câmara de Neubauer, a amostra deve ser diluída (entre 1:10 e 1:50 a depender da concentração) e para contagem em câmara de Makler, a amostra não deve ser diluída. Microscópicos Câmara de Neubauer Contagem em 5 quadrados do quadrante central (hemácias), cada um contendo 16 quadrados menores. CÂMARA DE NEUBAUER Concentração de espermatozoides (milhões/mL) = nº de espermatozoides contados x diluição x 50.000. Deve-se ler 10 quadrantes e multiplicar por 1 milhão. O número de espermatozoides contados em qualquer faixa de 10 quadrados indica a concentração em milhões por mL. CÂMARA DE MAKLER 05/06/2024 11 A contagem total é obtida do produto da concentração de espermatozoides pelo volume da amostra seminal, e o resultado é expresso em milhões de espermatozoides por ejaculado CONCENTRAÇÃO ESPERMÁTICA VALORES DE REFERÊNCIA PARA ESPERMOGRAMA SISTEMA DE CLASSIFICAÇÃO OMS TERMINOLOGIA UTILIZADA Notações mais utilizadas nos laudos diagnósticos de análise seminal e espermograma: Normozoospermia: concentração espermática dentro da normalidade, ou seja, maior que 15 milhões/ml. Oligozoospermia leve: abaixo de 15 milhões de espermatozoides/ ml. Oligozoospermia moderada: 5 a 10 milhões de espermatozoides /ml. Oligozoospermia acentuada: menor que 5 milhões de espermatozoides /ml. Criptozoospermia: Menor que 1 milhão de espermatozoides /ml. Polizoospermia: valores superiores a 250 milhões de espermatozoides /ml. Azoospermia: ausência total de espermatozoides no ejaculado total, podendo ser obeservadas células germinativas. Astenozoospermia: menor que 32% dos espermatozoides com movimentos progressivos. Discinesia: mais de 50% dos espermatozoides com movimentos erráticos. 05/06/2024 12 TERMINOLOGIA UTILIZADA Notações mais utilizadas nos laudos diagnósticos de análise seminal e espermograma: Necrozoospermia: mais de 58% dos espermatozoides mortos. Teratozoospermia: mais de 60% de espermatozoides com morfologia anormal. Hiperespermia: volume do ejaculado maior que 5,0 ml. Hipospermia: volume do ejaculado menor que 1,5 ml. Aspermia: ausência total do ejaculado. Hematospermia: Presença de hemácias em quantidade abundante. Piospermia: Mais de 1 milhão de piócitos/mL ou acima de 2 por campo em aumento de 40 X. Alterações de plasma seminal: Aumento da viscosidade, liquefação, alterações de pH, presença de corpos gelatinosos. • GADÊLHA, et al. Human sperm uses asymmetric and anisotropic flagellar controls to regulate swimming symmetry and cell steering. Science Advances. 2020. Vol 6, Issue 31 • COOPER et al. World Health Organization reference values for human semen characteristics. Hum Reprod Update. 2010;16(3):231-45 • PEREIRA, Orildo dos Santos. Espermograma: manual de bancada e atlas. 2. ed. São Paulo: Red Publicações, 2022. 94p. • BARCELOS, Luiz Fernando; AQUINO, Jerolino Lopes. Tratado de • análises clínicas. Rio de Janeiro: Atheneu, 2018. 810p. • STRASINGER, Susan King. . Uroanalise e fluidos biologicos. 3.ed. Sao Paulo: Ed. Premier, 2000. 233p. Referências bibliográficas