Roteiro Antibiograma (1)

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INSTRUÇÕES GERAIS
1. Neste experimento, você irá realizar um teste antibiograma pelo método de disco-difusão e correlacioná-lo ao aparecimento de cepas resistentes.
2. Utilize a seção “Recomendações de Acesso” para melhor aproveitamento da experiência virtual e para respostas às perguntas frequentes a respeito do VirtuaLab.
3. Caso não saiba como manipular o Laboratório Virtual, utilize o “Tutorial VirtuaLab” presente neste Roteiro.
4. Caso já possua familiaridade com o Laboratório Virtual, você encontrará as instruções para realização desta prática na subseção “Procedimentos”.
5. Ao finalizar o experimento, responda aos questionamentos da seção “Avaliação de Resultados”.
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RECOMENDAIÕES DE ACESSO
PARA ACESSAR O VIRTUALAB
ATENIÃO:
O LABORATÓRIO VIRTUAL DEVE SER ACESSADO POR COMPUTADOR. ELE NÃO DEVE SER ACESSADO POR CELULAR OU TABLET.
O REQUISITO MÍNIMO PARA O SEU COMPUTADOR É UMA MEMÓRIA RAM DE 4 GB.
SEU PRIMEIRO ACESSO SERÁ UM POUCO MAIS LENTO, POIS ALGUNS PLUGINS SÃO BUSCADOS NO SEU NAVEGADOR. A PARTIR DO SEGUNDO ACESSO, A VELOCIDADE DE ABERTURA DOS EXPERIMENTOS SERÁ MAIS RÁPIDA.
1. Caso utilize o Windows 10, dê preferência ao navegador Google Chrome;
2. Caso utilize o Windows 7, dê preferência ao navegador Mozilla Firefox;
3. Feche outros programas que podem sobrecarregar o seu computador;
4. Verifique se o seu navegador está atualizado;
5. Realize teste de velocidade da internet.
Na página a seguir, apresentamos as duas principais dúvidas na utilização dos Laboratórios Virtuais. Caso elas não se apliquem ao seu problema, consulte a nossa seção de “Perguntas Frequentes”, disponível em: https://algetec.movidesk.com/kb/pt-br/
Neste mesmo link, você poderá usar o chat ou abrir um chamado para o contato com nossa central de suporte. Se preferir, utilize os QR CODEs para um contato direto por Whatsapp (8h às 18h) ou para direcionamento para a central de suporte. Conte conosco!
PERGUNTAS FREQUENTES
1) O laboratório virtual está lento, o que devo fazer?
a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” -> “Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a opção e reinicie o navegador.
b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de máximo desempenho.
Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de vídeo instalado na máquina.
c) Feche outros aplicativos e abas que podem sobrecarregar o seu computador.
d) Verifique o uso do disco no Gerenciador de Tarefas (Ctrl + Shift + Esc) -> “Detalhes”. Se estiver em 100%, feche outros aplicativos ou reinicie o computador.
2) O laboratório apresentou tela preta, como proceder?
a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” -> “Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a opção e reinicie o navegador. Caso persista, desative a opção e tente novamente.
b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de máximo desempenho.
Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de vídeo instalado na máquina.
c) Verifique se o navegador está atualizado.
DESCRIIÃO DO LABORATÓRIO
MATERIAIS NECESSÁRIOS
· Jaleco;
· Luvas de procedimento;
· Máscara;
· Óculos;
· Caneta permanente;
· Swab;
· Estufa bacteriológica;
· Alça bacteriológica;
· Pinça metálica;
· Tubo de ensaio com solução salina;
· Escala de McFarland 0,5;
· Suporte para tubo de ensaio;
· Ágar Manitol;
· Ágar MacConkey;
· Placa meio Mueller Hinton;
· Bico de Bunsen;
· Multidisco Gram Positivo;
· Multidisco Gram Negativo;
· Acendedor mecânico.
	PROCEDIMENTOS
1.	SEGURANIA DO EXPERIMENTO
Lave as mãos na “Pia” e coloque os equipamentos de proteção individual localizados
no “Armário de EPIs”.
	
2. PREPARANDO A SUSPENSÃO
Identifique as placas de ágar Mueller Hinton com caneta permanente. Acenda o bico de Bunsen e flambe a alça bacteriológica. Posicione a placa de ágar Manitol próximo a chama do bico de Bunsen, destampe a placa e colete a amostra com a alça. Tampe a placa de coloque-a de volta na bancada. Mova o tubo de ensaio (1) com solução salina para o bico de Bunsen, retire a tampa e inocule a bactéria. Após finalizar a inoculação, flambe a alça, tampe o tubo, mova-o para o suporte e compare a turvação com a escala de McFarland 0,5. Repita esse processo inoculando a amostra da placa de ágar MacConkey no tubo de ensaio (2).
	
3. SEMEANDO A AMOSTRA
Inocule o swab no tubo de ensaio (1). Mova a placa de ágar Mueller Hinton (1) para o bico de Bunsen, retire a tampa e semeei a amostra na placa. Descarte o swab. Tampe a placa e coloque-a na bancada. Repita o mesmo procedimento inoculando o swab no tubo de ensaio (2) e semeando a placa de ágar Mueller Hinton (2). Retorne as placas para a bancada e aguarde 10 minutos para secar.
	
4. ADICIONANDO OS ANTIBIÓTICOS
Posicione a placa de ágar Mueller Hinton (1) próximo ao bico de Bunsen e retire a tampa da placa. Flambe a pinça metálica e adicione o multidisco de antibiótico para
	gram-positivos. Flambe novamente a pinça, tampe a placa e coloque-a na bancada.
Posicione a placa de ágar Mueller Hinton (2) próximo ao bico de Bunsen, retire a tampa da placa e adicione o multidisco de antibiótico para gram-negativos. Flambe a pinça ao final do processo e coloque-a na bancada. Tampe a placa de ágar Mueller Hinton, mova a placa para bancada. Coloque as duas placas na estufa, ligue o equipamento e aguarde 24 horas.
5. REALIZANDO A LEITURA
Abra a estufa e mova as placas de ágar Mueller Hinton para bancada. Ative o menu de resultados da prática. Utilize a régua para verificar o tamanho do halo de inibição do antibiótico. Preencha a tabela de resultados com o valor encontrado e informe a classificação. Realize a leitura completa das duas placas de antibiograma.
	
6. AVALIANDO OS RESULTADOS
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, neste roteiro, e responda de acordo com o que foi observado nos experimentos
AVALIAIÃO DOS RESULTADOS
1. Qual a importância do antibiograma no diagnóstico laboratorial?
2. Qual o princípio do método Kirby Bauber utilizado nessa aula?
3. Em seus resultados foram observadas amostras resistentes? Em quais amostras e antibióticos?
4. Relacione os resultados de resistência às amostras biológicas que foram utilizadas nesta aula prática.
5. Quais são os outros métodos para detecção da resistência aos antimicrobianos?
6. Qual a diferença entre as outras técnicas disponíveis e o método de disco-difusão?
TUTORIAL VIRTUALAB
1. SEGURANIA DO EXPERIMENTO
Visualize a pia clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Pia” localizada dentro do painel de visualização no canto superior esquerdo da tela. Se preferir, também pode ser utilizado o atalho do teclado “Alt+1”.
Higienize as mãos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a torneira da pia.
Visualize o armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Armário de EPIs”. Se preferir, também pode ser utilizado o atalho do teclado “Alt+2”.
Abra o armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse sobre as portas.
Selecione os EPIs necessários para a realização do ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse sobre eles. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas de látex, óculos e máscara.
2. PREPARANDO A SUSPENSÃO
Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome
“Experimento” ou através do atalho do teclado “Alt+3”.
Identifique as placas de ágar Mueller Hinton clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a caneta marcadora.
Visualize o bico de Bunsen clicando com o botão esquerdo do mouse nacâmera “Bico de Bunsen” ou utilizando o atalho do teclado “Alt+5”.
Ligue o gás do bico de Bunsen clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a válvula.
Ajuste a chama do bico de Bunsen clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele e movimentando a barra de ajuste para direito ou para esquerda.
Acenda o bico de Bunsen clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o acendedor mecânico.
Flambe a alça bacteriológica clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Visualize a bancada e mova a placa de ágar manitol para o bico de Bunsen clicando com o botão direito do mouse sobre ela e selecionando a opção “Colocar em bico de Bunsen”.
Destampe a placa de ágar manitol clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Colete a amostra da placa de Petri clicando com o botão direito do mouse sobre a alça
bacteriológica e selecionando a opção “Coletar amostra da placa”.
Tampe a placa de Petri clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Mova a placa para bancada clicando com o botão direito do mouse sobre ela e selecionando a opção “Colocar na bancada”.
Mova o tubo de ensaio para o bico de Bunsen clicando com o botão direito do mouse
sobre ele e selecionando a opção “Colocar no bico de Bunsen”.
Retire a tampa do tubo de ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Inocule a amostra no tubo de ensaio clicando com o botão direito do mouse sobre a alça bacteriológica e selecionando a opção “Inocular em tubo de ensaio”.
Flambe a alça bacteriológica clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a alça.
Tampe o tubo de ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a vidraria.
Mova o tubo de ensaio para o suporte clicando com o botão direito do mouse sobre o
tubo e selecionando a opção “Colocar no suporte”.
Visualize a bancada e mova a placa de ágar MacConkey para o bico de Bunsen clicando com o botão direito do mouse sobre ela e selecionando a opção “Colocar no bico de Bunsen”.
Destampe a placa de ágar MacConkey clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Colete a amostra da placa de Petri clicando com o botão direito do mouse sobre a alça
bacteriológica e selecionando a opção “Coletar amostra da placa”.
Tampe a placa de Petri clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Mova a placa para bancada clicando com o botão direito do mouse sobre ela e
selecionando a opção “Colocar na bancada”.
Mova o tubo de ensaio para o bico de Bunsen clicando com o botão direito do mouse
sobre ele e selecionando a opção “Colocar no bico de Bunsen”.
Retire a tampa do tubo de ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele.
Inocule a amostra no tubo de ensaio clicando com o botão direito do mouse sobre a alça
bacteriológica e selecionando a opção “Inocular em tubo de ensaio”.
Flambe a alça bacteriológica clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a alça.
Tampe o tubo de ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a vidraria.
Mova o tubo de ensaio para o suporte clicando com o botão direito do mouse sobre o
tubo e selecionando a opção “Colocar no suporte”.
Visualize a bancada e coloque a alça bacteriológica na bancada clicando com o botão
direito do mouse sobre ela e selecionando a opção “Colocar na bancada”.
3. SEMEANDO A AMOSTRA
Inocule o swab no tubo de ensaio 1 clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o swab.
Visualize a bancada e mova a placa de ágar Mueller Hinton para o bico de Bunsen clicando com o botão direito do mouse sobre a placa e selecionando a opção “Colocar no bico de Bunsen”.
Destampe a placa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Semeei a amostra na placa clicando com o botão direito do mouse sobre o swab e
selecionando a opção “Semear na placa”.
Descarte o swab clicando com o botão direito do mouse sobre ele e selecionando a
opção “Descartar”.
Tampe a placa de Petri clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Coloque a placa na bancada clicando com o botão direito do mouse sobre ela e
selecionando a opção “Colocar na bancada”.
Mergulhe o swab no tubo de ensaio 2 clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o swab.
Visualize a bancada e mova a placa de ágar Mueller Hinton para o bico de Bunsen clicando com o botão direito do mouse sobre a placa e selecionando a opção “Colocar no bico de Bunsen”.
Destampe a placa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Semeei a amostra na placa clicando com o botão direito do mouse sobre o swab e
selecionando a opção “Semear na placa”.
Descarte o swab clicando com o botão direito do mouse sobre ele e selecionando a opção “Descartar”.
Tampe a placa de Petri clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Coloque a placa na bancada clicando com o botão direito do mouse sobre ela e
selecionando a opção “Colocar na bancada”.
Aguarde as placas secarem por 10 minutos.
4. ADICIONANDO OS ANTIBIÓTICOS
Flambe a pinça metálica clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o objeto.
Visualize a bancada e mova a placa de ágar Mueller Hinton para o bico de Bunsen clicando com o botão direito do mouse sobre a placa e selecionando a opção “Colocar no bico de Bunsen”.
Destampe a placa de Petri clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Adicione o multidisco de antibiótico na placa clicando com o botão direito do mouse sobre a pinça e selecionando a opção “Colocar disco na placa”.
Flambe a pinça clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Tampe a placa de Petri clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o objeto.
Mova a placa de Petri para bancada clicando com o botão direito do mouse sobre ela e
selecionando a opção “Colocar na bancada”.
Mova a segunda placa de ágar Mueller Hinton para o bico de Bunsen clicando com o
botão direito do mouse sobre ela e selecionando a opção “Colocar em bico de Bunsen”.
Destampe a placa de Petri clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Adicione o multidisco de antibiótico na placa clicando com o botão direito do mouse
sobre a pinça e selecionando a opção “Colocar disco na placa”.
Flambe a pinça clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Tampe a placa de Petri clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o objeto.
Mova a placa de Petri para bancada clicando com o botão direito do mouse sobre ela e
selecionando a opção “Colocar na bancada”.
Mova a pinça para bancada clicando com o botão direito do mouse sobre ela e
selecionando a opção “Colocar na bancada”.
Visualize o bico de Bunsen e feche a válvula do gás clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a válvula.
Visualize a bancada e mova as duas placas de ágar Mueller Hinton para a estufa clicando
com o botão direito do mouse sobre ela e selecionando a opção “Colocar em estufa”.
Feche a estufa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela.
Ligue a estufa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de energia
“power”.
Aguarde por 24 horas até o período de crescimento finalizar.
5. REALIZANDO A LEITURA
Desligue a estufa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de energia.
Abra a estufa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a porta.
Mova a placa de ágar Mueller Hinton para bancada clicando com o botão direito do mouse sobre ela e selecionando a opção “Colocar na bancada”. Repita esse passo com a segunda placa.
Inicie a leitura do resultado clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o ícone
“Resultados placa 1” localizado no canto superior direito da tela.
Meça o diâmetro do halo de inibição clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a régua marcando o ponto inicial e o ponto final do halo.
Preencha a tabela com o valor encontrado clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o espaço correspondente ao antibiótico analisado.
Classifique a ação do antibiótico clicando com o botãoesquerdo do mouse sobre a célula correspondente da coluna “Classificação (BrCast)” e selecionando uma das opções disponíveis. Repita esse processo de leitura e classificação com todos os antibióticos.
Realize a leitura da segunda placa de antibiograma clicando com o botão esquerdo do
mouse sobre o ícone “Resultados placa 2” localizado no canto superior direito da tela.
6. AVALIANDO OS RESULTADOS
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, neste roteiro, e responda de acordo com
o que foi observado nos experimentos