aula-pratica-elisa-v-3-out-12-17

Prévia do material em texto

Ensaio Imunossorvente
ligado à enzima-
ELISA
M.V. Thaís Gasparini Baraldi
Mestranda em Medicina Veterinária
Laboratório de Pesquisa em Suínos – FCAV/Unesp
Prof. Helio José Montassier
Resp. Disciplina Imunologia 
Veterinária
Melhores Métodos Diagnósticos
5 pré-requisitos:
•Rapidez
• Simplicidade
• Sensibilidade
• Especificidade 
•Baixo custo
MURPHY et al. (1999)
Por que realizar testes diagnósticos?
Enzyme-linked immunosorbent assay - ELISA
• Teste de ligação primária 
• ELISA indireto
• ELISA competitivo
• ELISA sanduíche (de captura)
• ELISA competitivo
DETECÇÃO DE ANTÍGENOS (Ag)
DETECÇÃO DE ANTICORPOS (Ac)
Cuidados na colheita 
de soros para uso no 
ELISA
Etapas ELISA
1. Diluição do soro sanguíneo
2. Incubação
3. Lavagem
4. Anticorpo conjugado à enzima
5. Incubação
6. Lavagem
7. Substrato
8. Incubação
9. Solução de parada 
10. Leitura
COR
ELISA INDIRETO
BOVINOS:- Detecção de Acs anti-BVDV, anti-BoHV, anti-Paramyxovirus (Parainfluenza bovina), etc.
SUÍNOS:- Detecção de Acs anti-SIV, anti-Circovirus, anti-Parvovirus, anti-Mycoplasma, anti-Actinobacillus, etc.
CÃES:- Detecção de Acs anti-Virus da cinomose, anti-parvovírus, anti-vírus rábico, anti-leptospira, etc.
ELISA INDIRETO
ELISA-SANDUÍCHE (Captura)
ELISA COMPETITIVO- detecção de Acs
BOVINOS:- Detecção de Acs anti-FMDV.
SUÍNOS:- Detecção de Acs anti-SIV.
Ensaio Imunoenzimático
VANTAGENS
• Alta sensibilidade
• Boa especificiade
• Baixo custo
• Kits
• Versatilidade (amostras 
individuais e grande escala)
DESVANTAGENS
• Aparelhos para a lavagem das 
placas
• Espectofotômetro-leitura da 
reação 
• Reações inespecíficas 
• Problemas na pureza do 
antígeno para alguns tipos de 
vírus
Thaís Gasparini Baraldi
thaisbaraldi@hotmail.com
Obrigada!