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Introdução O espermograma é um exame que analisa as condições físicas e composição do sêmen humano. É usado para avaliar a função produtora do testículo, próstata e vesícula seminal. Identifica problemas de esterilidade masculina. Análise de sêmen O Objetivo é demonstrar as características fisiológicas e anatômicas na formação do sêmen, sua análise e descrição baseadas em características físicas, químicas e microscópicas sêmen É um líquido corporal viscoso ejaculado pelo pênis, sua composição é uma mistura de espermatozóides, secreções dos testículos, epidídimos, próstata, vesículas seminais e glândulas bulbouretrais. Vias espermáticas É todo o trajeto percorrido pelos espermatozóides desde sua formação, armazenamento e ejaculação. Trajeto: Túbulos seminíferos, epidídimo, canal deferente e uretra. Vesículas seminais Localizada entre o fundo da bexiga e o reto, acima da próstata Produzem o líquido seminal, um fluido viscoso que se mistura a outras secreções e aos espermatozoides para formar o sêmen. Junto com o líquido prostático funciona como fonte de energia para os espermatozoides Líquido seminal Aminoácidos Citrato Enzimas Frutose Próstata Enzimas Fosfatase ácida Ácido cítrico Fibrinolisina Antígeno específico da próstata Glândulas bulbouretrais Muco Galactose Pênis Tipicamente, 2-5 mL de sêmen são expelidos por ejaculação. Cada mL de sêmen pode conter 300-500 milhões de espermatozóides Espermograma Análise do sêmen é indicada em casos de infertilidade, avaliação e controle do paciente pós- vasectomizado e avaliação de doenças testiculares e penianas sobre a espermatogênese Exame Dividido em 3 partes: Exame Macroscópico Exame Microscópico Exame Físico-químico Exame Macroscópico Volume 2 a 6 ml. Cor Branco-acizentado e opalescente, ou levemente amarelado. Odor Semelhante a água sanitária. Exame após vasectomia Mais simples – objetivo é detectar a presença ou não de espermatozóides. Exames mensais começando dois meses após a cirurgia. Recomenda-se centrifugar a amostra. Exame pericial. Avaliar se uma amostra é sêmen. Ex: caso de estupro. Exame microscópio – espermatozóide. Exame bioquímico – teor de fosfatase ácida. Método mais confiável. O sêmen é o único no organismo que tem essa enzima em concentração elevada. Coleta do material A amostra deve ser coletada após um período de abstinência sexual de 3 a 5 dias. O paciente deve ser instruído para evitar perda de material, principalmente o 1º jato, que contém a maior concentração de espermatozóides. Coleta do material Se a abstinência sexual for superior a 5 dias, aumenta o número de formas imaturas, o número de espermatozóides mortos e o volume do sêmen; se a abstinência sexual for inferior a 3 dias, diminui o volume do sêmen e o número de espermatozóides. Coleta do material A amostra deve ser obtida por masturbação e ejaculada dentro de um recipiente de boca larga de vidro ou plástico. Deve-se evitar temperaturas extremas (-20°C ou +40°C ). Coleta Masturbação Técnicas vibratórias. Eletro-ejaculação (pacientes com lesão medular). Punção de epidídimo. Coleta do material O frasco contendo a amostra deve ser identificado, contendo o nome do paciente, o período de abstinência sexual, data e hora da coleta, o nome do medicamento em uso. Coleta do material Duas amostras devem ser coletadas num período de 7 dias à 90 dias. Se o resultado dessas duas análises for discrepante, análises adicionais deverão ser realizadas. Coleta do material O ideal é coletar o material no laboratório, porém, se isso não for possível, a amostra deve ser enviada ao laboratório dentro de no máximo 1 hora após a coleta. Coleta do material Preservativos não devem ser usados na coleta, pois podem interferir com a viabilidade dos espermatozóides. Coleta do material No caso da realização de uma avaliação microbiológica, o paciente deve primeiro urinar e depois fazer assepsia das mãos e pênis antes de ejacular num frasco esterilizado. Coleta do material Quando houver dosagem de frutose no sêmen, o paciente deve fazer um jejum alimentar de 12 horas Exames Macroscópicos Nível de frutose > 3 mg/ml. Reação de peroxidase Análise hormonal Nível de Testosterona LH/FSH Exame Físico-Químico Viscosidade Teste da pipeta Viscosímetro (padrão ouro) Consistência Consistência gelatinosa. Sofre coagulação (fibrinogênio). Torna-se liquefeito após 10 a 30 min. (fibrolisina). pH 7.2 a 8.1. Levemente básico. Exames macroscópicos Liquefação ou coagulação Volume Aspecto Cor Viscosidade pH Liquefação e coagulação Após a ejaculação, o esperma transforma-secoágulos para facilitar a dispersão dos espermatozóides e protegê-los do contato com o pH vaginal ácido. A amostra seminal normal se liquefaz em até 60 minutos devido à ação das espermolisinas contidas na secreção prostática. Liquefação e coagulação Colocar a amostra em uma estufa a 37°C e verificar de 5 em 5 minutos quando se inicia a liquefação, cronometrando, assim, o tempo que leva para uma amostra se liquefazer totalmente. Liquefação e coagulação Ausência de coagulação: ausência de fatores de coagulação: agenesia ou obstrução dos ductos das vesículas seminais; Ausência de liquefação: ausência de fatores de liquefação: agenesia ou afecções da próstata; Liquefação parcial: deficiência de fatores de liquefação (próstata) volume O volume seminal final é diretamente proporcional à quantidade de secreção da próstata e das vesículas seminais e glândulas, já que o volume proveniente dos testículos e epidídimo é reduzido volume - Hipoespermia: vol. < 2,0 ml Insuficiência ou ausência de abstinência sexual ; Insuficiência vesicular (Clamydia ou Mycoplasma) ; Baixos níveis séricos de testosterona; volume - Hiperespermia: vol. > 5,0 ml Abstinência sexual prolongada; Tumores benignos ou malignos próstato-vesiculares; volume - Aspermia: ausência de ejaculado Agenesias; Alterações no controle neurológico da ejaculação Aspecto Deve ser analisado após liquefação por simples inspeção à temperatura ambiente. Aspecto Amostra normal: aparência homogênea e opaca Amostra anormal: aspecto heterogêneo por agregados protéicos de consistência firme e incolor: causados por períodos prolongados de abstinência sexual, diminuição dos níveis de testosterona, alterações nas concentrações de espermolisinas, processos inflamatórios genitais cor Normalmente o sêmen é branco-opaco. A presença de leucócitos em grande quantidade confere ao esperma uma cor amarelada, enquanto que a presença de hemácias confere uma cor avermelhada. Outras tonalidades podem se dar devido ao uso de medicamentos. Viscosidade e consistência Estimada através de uma pipeta de 5 ml, deixando o sêmen sair da pipeta pela ação da gravidade e observando Viscosidade e consistência Viscosidade Diminuída: a amostra se desprende da pipeta em gotas; Viscosidade Normal: a amostra se alongará em filetes com menos de 2 cm; Viscosidade Aumentada: a amostra se alongará em filetes com mais de 2 cm de comprimento. ph Medir o pH do sêmen através de fita de pH. Valor Normal: 7,5 a 8,5 pH acima de 8,5: deficiência da glândula prostática pH abaixo de 7,5: deficiência das vesículas seminais Exames Microscópicos Motilidade Vitalidade Contagem dos espermatozóides Contagem de leucócitos e hemácias Morfologia dos espermatozóides Espermatozóides Espermatozóides http://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=espermatozoides microscopio&source=images&cd=&cad=rja&docid=tJWHlHiSrsvkWM&tbnid=s4Ved1VpgdI4SM:&ved=0CAUQjRw&url=http://www.dicyt.com/viewItem.php?itemId=4563&ei=mSsWUofxII6e9QS4iIG4Cw&psig=AFQjCNEERJYhHYk7M74nCWRiCMd6L7-jXA&ust=1377270997896293 http://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=espermatozoidesmicroscopio&source=images&cd=&cad=rja&docid=tJWHlHiSrsvkWM&tbnid=s4Ved1VpgdI4SM:&ved=0CAUQjRw&url=http://www.dicyt.com/viewItem.php?itemId=4563&ei=mSsWUofxII6e9QS4iIG4Cw&psig=AFQjCNEERJYhHYk7M74nCWRiCMd6L7-jXA&ust=1377270997896293 http://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=espermatozoides microscopio&source=images&cd=&cad=rja&docid=tJWHlHiSrsvkWM&tbnid=s4Ved1VpgdI4SM:&ved=0CAUQjRw&url=http://www.dicyt.com/viewItem.php?itemId=4563&ei=mSsWUofxII6e9QS4iIG4Cw&psig=AFQjCNEERJYhHYk7M74nCWRiCMd6L7-jXA&ust=1377270997896293 http://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=espermatozoides microscopio&source=images&cd=&cad=rja&docid=tJWHlHiSrsvkWM&tbnid=s4Ved1VpgdI4SM:&ved=0CAUQjRw&url=http://www.dicyt.com/viewItem.php?itemId=4563&ei=mSsWUofxII6e9QS4iIG4Cw&psig=AFQjCNEERJYhHYk7M74nCWRiCMd6L7-jXA&ust=1377270997896293 http://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=espermatozoides microscopio&source=images&cd=&cad=rja&docid=tJWHlHiSrsvkWM&tbnid=s4Ved1VpgdI4SM:&ved=0CAUQjRw&url=http://www.dicyt.com/viewItem.php?itemId=4563&ei=mSsWUofxII6e9QS4iIG4Cw&psig=AFQjCNEERJYhHYk7M74nCWRiCMd6L7-jXA&ust=1377270997896293 http://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=espermatozoides microscopio&source=images&cd=&cad=rja&docid=GZK7A8DVjUTuAM&tbnid=_AKWge_xMAK0cM:&ved=0CAUQjRw&url=http://reproducaodeaaz.blogspot.com/2013/01/terceiro-dia.html&ei=siwWUtqCJoO69QTF_4EI&psig=AFQjCNEERJYhHYk7M74nCWRiCMd6L7-jXA&ust=1377270997896293 http://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=espermatozoides microscopio&source=images&cd=&cad=rja&docid=GZK7A8DVjUTuAM&tbnid=_AKWge_xMAK0cM:&ved=0CAUQjRw&url=http://reproducaodeaaz.blogspot.com/2013/01/terceiro-dia.html&ei=siwWUtqCJoO69QTF_4EI&psig=AFQjCNEERJYhHYk7M74nCWRiCMd6L7-jXA&ust=1377270997896293 http://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=espermatozoides microscopio&source=images&cd=&cad=rja&docid=flPC4wgWrAUZoM&tbnid=U6_zq93J8wqPxM:&ved=&url=http://www.retrieverslasolana.com/Retrievers La Solana_archivos/Consejos.htm&ei=VSsWUtKtHoTA8ATIz4GIAw&psig=AFQjCNEERJYhHYk7M74nCWRiCMd6L7-jXA&ust=1377270997896293 Motilidade A avaliação da motilidade deve ser realizada até 60 minutos após a coleta, observando os espermatozóides em objetiva de menor aumento, rastreando 8 a 10 campos para avaliar 100 espermatozóides obtendo a porcentagem. Idealmente, a avaliação da motilidade espermática deve ser realizada com a utilização de câmaras apropriadas, que possuem profundidade conhecida (ex.: Makler®, Horwell®, Microcell®) e permitem a livre movimentação dos espermatozoides Pelo menos duzentas células são avaliadas, e o cálculo final é expresso em termos percentuais. De maneira alternativa, pode-se avaliar a motilidade com o uso de lâmina e lamínula. Para tanto, deposita-se cerca de 10 µL de sêmen liquefeito sobre lâmina de microscopia, aquecida a 37 ºC, e cobre-se com lamínula. Motilidade Câmara de Neubauer modificada (à esquerda). No centro, ilustração representando seu retículo central, que contém 25 quadrados subdivididos em 16 quadrados menores. À direita, fotomicrografia mostrando um dos 25 quadrados do retículo central da câmara, delimitado por linhas triplas e contendo 16 quadrados menores, nos quais se observam os espermatozoides. Motilidade Classificação A-espermatozóides com motilidade rápida e progressiva (para frente); B-espermatozóides com motilidade lenta e progressiva; C-espermatozóides com motilidade não progressiva; D-espermatozóides imóveis. Motilidade VALOR NORMAL: Acima de 50% de espermatozóides em A + B Acima de 25% de espermatozóides em A Astenospermia: abaixo de 50% das categorias A + B Motilidade Astenospermia extrínseca: devido a aumento da viscosidade; Astenospermia intrínseca: nível baixo ou ausente de frutose Vitalidade A vitalidade dos espermatozóides se reflete na proporção de espermatozóides que estão vivos. Vitalidade O resultado é expresso em % de espermatozóides vivos Valor Normal: acima de 70% de espermatozóides vivos Necrospermia: acima de 30% de espermatozóides mortos. CONTAGEM DOS ESPERMATOZÓIDES São contados apenas os espermatozóides maduros, com cauda Contar em Câmara de Newbauer, ou lâmina de vidro Contagem de espermatozóides Câmara de Neubauer com diluição de 1:20. Imobilizar Contar 5 e multiplicar por 40.000. Normal (OMS): 20 a 160 milhões/ml. CONTAGEM DOS ESPERMATOZÓIDES Valor Normal: acima de 20.000.000/ml Oligozoospermia: quando o número de espermatozóides é menor que 20.000.000/ml A oligozoospermia pode ser permanente e periódica Causas: infecção do trato genital, anomalias cromossômicas, alterações hormonais e pouca abstinência sexual. CONTAGEM DOS ESPERMATOZÓIDES Azoospermia: ausência de espermatozóides no sêmen. Causas: são as mesmas que causam oligozoospermia, além de agenesias gonodais Câmara de neubauer http://www.google.com.br/url?sa=i&source=images&cd=&cad=rja&docid=C9cZLWVv8F2GyM&tbnid=q1fNehcr6lGaVM:&ved=0CAgQjRwwAA&url=http://www.protocolosbiomed.com.br/page_19.html&ei=0RcWUs3-GoLa8AS61YGgBA&psig=AFQjCNHhcIeJhqHwr3f4U5bqgHZf9wN-5g&ust=1377266001500487 CONTAGEM DE LEUCÓCITOS E HEMÁCIAS O procedimento é o mesmo para contar leucócitos/hemácias em Hematologia. Na diluição 1:200, multiplica-se o resultado por 500. O valor é expresso em mm³. CONTAGEM DE LEUCÓCITOS E HEMÁCIAS Leucospermia: valor de leucócitos acima de 5 por campo Eosinofilia de até 25%: processos auto- imunes Neutrofilia: prostato-vesiculites agudas Linfócitos e Monócitos: processos crônicos CONTAGEM DE LEUCÓCITOS E HEMÁCIAS Eritrospermia (sem alteração da cor do sêmen) até 2 por campo, Espermorragia (sêmen cor hemorrágica): processo infeccioso em atividade, neoplasias ou sinal precoce de hipertensão arterial sistêmica. MORFOLOGIA DOS ESPERMATOZÓIDES Espermatozóide normal: cabeça oval, o acrossoma ocupa uma área entre 40% - 70% da região cefálica, peça intermediária e flagelo normais. Espermatozóides anormais: com defeitos na forma e tamanho da cabeça, defeitos na peça intermediária e com defeitos da cauda Espermatozóide http://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=espermatozoide&source=images&cd=&cad=rja&docid=7R033q_-TNE47M&tbnid=P3MyD6BvQiTuNM:&ved=0CAUQjRw&url=http://www.infoescola.com/reproducao/espermatozoide/&ei=HCcWUoPwCIXW9AT46IGACg&bvm=bv.51156542,d.eWU&psig=AFQjCNEPjTrx9D3TYyJZzo13zTazXKd-kg&ust=1377269901877221 MORFOLOGIA DOS ESPERMATOZÓIDES Macrocéfalos : 15% Microcéfalos : 10% Bicéfalos : 05% Ectasias : 05% Amorfos : 10% Bicaudais : 05% Desenho esquemático do espermatozoide humano visto à microscopia óptica, com as medidas utilizadas na avaliação morfométrica, segundo o critério estrito de Tygerberg (quadro à esquerda). No centro e à direita, ilustrações representando os defeitos morfológicos mais comuns. MORFOLOGIA DOS ESPERMATOZÓIDES Valor Normal: acima de 60% de espermatozóides normais. Teratospermia: acima de 40% de formas anormais. Morfologia Células Presentes • Podem aparecer, poucas por campo: Hemácias. Leucócitos. Células epiteliais. Anormais: Colônias de Bactéria. Trichomonas. Fungos (cândida). Principais Anomalias Oligoespermia: concentração de espermatozoides inferior a 20 milhões/ cm3. Azoospermia: ausência de espermatozoides no esperma. Aspermia: ausência de esperma. Astenospermia: espermatozoides com pouca motilidade. Teratospermia: > 70% de espermatozoides mutantes. Hematospermia: presença de sangue no esperma. Leucocitospermia: presença de leucócitos no esperma. Laudo Espermograma Material: Sêmen Anamnese: Hora da colheita: Hora da Realização do exame: Dias de abstenção: Dados Relativos ao Material Seminal Colhido: Volume: Cor: Aspecto: Viscosidade: Coagulação: Liquefação: pH: Valor do pH: Exames Microscópicos: Nº. de espermatozoides /ml: Nº. Total de espermatozoides: Outros Elementos: Hemácias: Bactérias: Leucócitos: Trichomonas: Fungos: Estrutura da Motilidade em %: Após Liquefação: Ativa: Pouco Ativa: Inativa: Após 2, 4, 6, 12 horas: Ativa: Pouco Ativa: Inativa: Espermocitograma: Espermatozoides morfologicamente Normais: Espermatozoides morfologicamente Anormais: Fotomicrografias de espermatozoides apresentando defeitos morfológicos na cabeça: (A) macrocefálico; (B) microcefálico; (C) fusiforme; (D) piriforme; (E) redondo; (F) e (G) amorfo; (H) vacuolado (com mais de dois vacúolos ou mais de 20% da área da cabeça ocupada por vacúolos). Os esfregaços foram corados pelo método panótico, e os espermatozoides foram avaliados pelo critério estrito de Tygerberg (Kruger). Diferenciação das células redondas presentes no sêmen, utilizando o teste de Endtz. À esquerda: célula redonda peroxidase negativa (seta larga) e granulócito peroxidase-positivo (P+). À direita: visão geral de uma lâmina contendo vários granulócitos peroxidase- -positivos. Outros exames Viabilidade – Corante de eosina 0,5% em soro fisiológico. Células mortas coram-se em vermelho em fundo azul. As vivas continuam branco-azuladas. 1 gota cada, lamínula 24X50, câmara úmida – 37°C, 5 min. Imóveis não corados (1), imóveis corados (mortos) e móveis não corados (3). VR: > 70% vivos. Dosagem de frutose – pode dar contagem baixa por falta de nutrição. Dosar até 2 h após. Reflete função das vesículas seminais. Origem: glicose sanguínea. Dosagem de ácido cítrico – parece estar ligado a liquefação e coagulação. Mede atividade prostática. Teste de fragmentação do DNA espermático Avaliação da vitalidade espermática pelo método da eosina. Espermatozoides com a cabeça corada em rosa são considerados “mortos” (membrana plasmática não intacta, que permite a entrada do corante supravital), e os não corados (cabeça branca) são considerados “vivos”, pois possuem a membrana íntegra, que não permite a entrada do corante. Teste de fragmentação do DNA espermático Avalia a estrutura do DNA e a cromatina A integridade do DNA indica o percentual de fertilidade a partir de valores que variam de 15%, quando é considerada excelente, a 50%, se for baixa. Referências MILLER, Otto. et al. Laboratório para o clínico. 8.ed. São Paulo: Atheneu, 1999 http://www.unifesp.br/grupos/rhumana/spm.htm http://www.laboratoriokenya.com.br/espermograma.html http://salud.kioskea.net/faq/2618-examenes-para-diagnosticar-la- esterilidad-en-el-hombre http://laboratorioclinicohn.blogspot.com.br/2010/08/espermograma.html http://www.docstoc.com/docs/104275090/Semen-Analysis-(PowerPoint) http://www.ebah.com.br/content/ABAAABe4IAA/espermograma-analise- semem http://pt.wikipedia.org/wiki/Espermograma http://en.wikipedia.org/wiki/Semen_analysis http://www.unifesp.br/grupos/rhumana/spm.htm http://www.laboratoriokenya.com.br/espermograma.html http://salud.kioskea.net/faq/2618-examenes-para-diagnosticar-la-esterilidad-en-el-hombre http://laboratorioclinicohn.blogspot.com.br/2010/08/espermograma.html http://www.docstoc.com/docs/104275090/Semen-Analysis-(PowerPoint) http://www.ebah.com.br/content/ABAAABe4IAA/espermograma-analise-semem http://pt.wikipedia.org/wiki/Espermograma http://en.wikipedia.org/wiki/Semen_analysis