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Aula 3. Organização Gênica em Eucarionte II Cromatina e histonas Cromosssomo Estrutura do RNA (principais diferenças com o DNA) DNA, cromatina e cromossomo. DNA, cromatina e cromossomo. LOCALIZAÇÃO DO DNA NO CONTEXTO CELULAR Proteínas histonas e não histonas Condensação da Fibra de Cromatina Vários níveis de condensação Molécula de DNACromatina = Histonas + Ptns Não-Histonas + DNA Composição da CROMATINA ✓ DNA ✓ Proteínas • básicas, chamadas histonas. 5 classes: H1, H2a, H2b, H3 e H4 • acídicas, chamadas de proteínas não histonas. ✓Subunidades: nucleossomos Os octâmeros de histonas protegem o segmento de DNA no centro do nucleossomo contra a clivagem (quebra) por nucleases A histona H1 estabiliza duas voltas completas de DNA , na superfície do octâmero de histonas. Composição da CROMATINA ✓Subunidades: nucleossomos Composição da CROMATINA ✓Subunidades: nucleossomos • Nucleossomo é o componente básico estrutural da cromatina de eucariotos • Composição do Nucleossomo: centro do nucleossomo (146pb de nucleotídeos + octâmero de histonas), DNA de ligação, uma molécula de histona H1 (estabiliza duas voltas completas de DNA) e proteínas não histonas Nucleossomos (diâmetro 11nm) 1º nível de compactação dos cromossomos “Colar de contas”: cada conta = centro do nucleossomo Octâmero de Histonas Fibra de Cromatina (diâmetro 30nm) 2º nível de compactação DNA Cromossomos Genoma Cada molécula de DNA é compactada em cromossomos que são 10.000 vezes menores • DNA polímero de nucleotídeos, contém as informações genéticas; • Cromossomomolécula de DNA compactada (DNA + PTNS); • Genoma conjunto de cromossomos de dada espécie; • Genoma Humano 46 cromossomos ✓ 22 pares de cromossomos autossômicos ✓ 1 par de cromossomos sexuais ✓ Total: 3,2 bilhões de pares de bases A cada divisão a célula deve copiar seu genoma e transmití-lo às células filhas RNA: aspectos funcionais ✓Transferência da informação genética ✓ RNA serve de molde para a síntese de proteínas ou ser o próprio produto final (Ex.: RNAr, RNAt, etc); ✓ Para alguns grupos de vírus: armazenamento da informação genética ✓Nos vírus de RNA: o RNA se replica ✓Nos retrovírus : ocorre a transcrição reversa do RNA RNA: aspectos funcionais ✓ Alguns RNAs podem atuar como enzimas: apresentam atividade catalítica, comportando-se como enzimas. São chamados de ribozimas. ✓ Atuam no processamento do RNAm e são capazes de cortar e remover sequências específicas de sua própria molécula ou de outros RNAs. Características químicas do RNA ✓ Fita simples de 65 – 200.000 nucleotídeos. ✓ Se o RNA não tem outra fita complementar, a regra de chargaff não se aplica. Logo, A+G ≠U+C. ✓A sequência do RNA é complementar a um trecho de uma das fitas de DNA. RNA: principais tipos e suas funções na célula RNA: aspectos estruturais ✓ Apresenta estrutura helicoidal ✓ O RNA pode formar um híbrido pareando com uma fita de DNA ou com outra fita de RNA por complementaridade. RNA de transferência (RNAt) ✓ 15% do RNA celular ✓ Funções: ✓ ativam os aminoácidos , favorecendo a formação das ligações peptídicas. Os AAs ativados são, então, transportados para os ribossomos, onde são transferidos para a cadeia polipeptídica; ✓ Reconhecem a informação no RNAm, nos códons, assegurando que o aminoácido correto seja incorporado. ✓ Existe um RNAt específico para cada AA. ✓ Formato: folha de trevo RNA de transferência (RNAt) RNA ribossomal (RNAr) ✓ 80% do RNA celular ✓A síntese de proteínas ocorre nos ribossomos. A porção de RNA nos ribossomos constitui 60-65% do peso total do ribossomo. Os ribossomos tem duas subunidades (maior e menor). ✓ Cada subunidade é formada 1-3 moléculas de RNAr e inúmeras proteínas. RNA mensageiro (RNAm) ✓ 5-10% do RNA celular ✓ As sequencias de bases do RNAm determinam a ordem de AAs nas proteínas sintetizadas. ✓ Tamanho variado, uma vez que codificam proteínas dos mais diversos tamanhos. ✓ Os detalhes sobre a sua síntese (transcrição) e processamento serão vistos em aulas futuras. Aula 3. ORGANIZAÇÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS •Proteínas HU • DNA circular (cromossomo) • Plasmídeos •Origem de Replicação Cromossomo único → dsDNA circular Exceções Lineares Streptomyces lividans Rhodococcus fasciens Espiroquetas (Borrelia) Organização gênica procariotos ◙ Cromossomo • O cromossomo bacteriano é organizado em uma estrutura compacta, conhecida como nucleóide, por interação do DNA com proteínas e RNA. • Várias proteínas se ligam ao DNA para compactá-lo: proteína HU. Outra proteína, a H1, também se liga ao DNA, interagindo preferencialmente com seqüências que estão dobradas. • Quando observado ao microscópio, o nucleóide pode ser visto como um aglomerado compacto que ocupa cerca de um terço do volume da célula. Empacotamento do DNA cromossomal Empacotamento do DNA cromossomal O cromossomo de E. coli está organizado em cerca de 50 a 100 alças; cada uma delas é superespiralada independentemente Superespiralamento do DNA cromossomal Ex.: fio do telefone • Ás vezes, o fio se enrola sobre ele mesmo, ficando mais curto. • Esse enrolamento é uma superespira, pois o fio do telefone já é uma espira, e sobre ela foi formada outra. Assim, o superespiralamento significa o espiralamento de uma espiral. PROCARIOTO ◙ Cromossomo de E. coli • Molécula de DNA fita dupla circular de 4,2 X 10³ pb. • Por ser capaz de se auto-duplicar, o cromossomo bacteriano é considerado um replicon. • Sua estrutura compacta dedica-se quase que exclusivamente à codificação de proteínas (genes estruturais). • Constituídos por uma molécula de DNA fita dupla circular. • Elementos extra-cromossomais com capacidade de replicação autônoma, ou seja, se replicam independentemente do cromossomo bacteriano e da divisão da bactéria. • Por isso, e por não transportarem genes do cromossomo bacteriano nem essenciais à sobrevivência da bactéria, os plasmídios são considerados elementos genéticos acessórios; • Possuem de mil a mais de 30 mil pb. São, portanto, dez a mil vezes menores que o cromossomo bacteriano. • Uma bactéria pode transportar de um a vários plasmídios diferentes, ou mesmo não transportar nenhum. DNA extra cromossomal: Plasmídeos DNA extra cromossomal: Plasmídeos • Conferem vantagens adaptativas às bactérias que os possuem. → produção de toxinas → produção de adesinas (complexos protéicos que reconhecem e se ligam a receptores também protéicos na superfície da célula do hospedeiro, permitindo sua aderência ao hospedeiro) • Conferem resistência a múltiplos antibióticos (tornam problemático o tratamento de determinadas infecções.) DNA extra cromossomal: Plasmídeos • As bactérias não constroem seus próprios plasmídios; elas os adquirem através do fenômeno da conjugação bacteriana, no qual uma bactéria transportando um plasmídio o transfere para outra bactéria, mantendo para si uma cópia dele. • Os plasmídios podem ser usados como veículos para a clonagem molecular, pois contêm os elementos necessários para sua replicação e pelo menos um gene que confere resistência a antibióticos. Ori C: encontrado tanto nos plasmídeos quanto no DNA cromossomal