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BIOQUÍMICA CLÍNICA DRA KELLY G. LIMA AULA 1 01. Conceitos Aplicados à Bioquímica Clínica CONTEÚDOS 02. Métodos e Técnicas em Bioquímica Clínica 03. Aquisição e Interpretação de Dados Bioquímicos 04. Aspectos da Qualidade na Medicina Laboratorial 05. Avaliação Laboratorial da Função Renal Laboratório Clínico A realização dos testes laboratoriais auxilia: prevenção, diagnóstico, prognóstico e monitoramento das doenças. Os setor de bioquímica do laboratório é o que realiza a maior quantidade de exames diferentes, principalmente para avaliar o metabolismo de carboidratos e lipídeos, funções renal, hepática, cardíaca e de eletrólitos. Atendimento Ambulatorial Posto de coleta Posto de coleta Posto de coleta Centrais Analíticas: auxiliares, técnicos, analistas e patologistas clínicos. Atendimento Hospitalar Emergência Internação UTI Centrais Analíticas: auxiliares, técnicos, analistas e patologistas clínicos. Conceitos Homeostase corporal: equilíbrio dos componentes bioquímicos levando ao funcionamento perfeito das funções biológicas. Analito: substância analisada em uma amostra biológica. Ex: glicose no sangue. Valores de referência (V.R): intervalo obtido em estudos populacionais com pacientes normais (média e desvio padrão). Resultado normal: dentro dos valores de referência. Resultado alterado: fora dos valores de referência. *Observar variações nos V.R de acordo com idade, sexo, horário, jejum, uso de medicamentos. Exemplo de analisador bioquímico automatizado Número expressivo de exames/hora: Código de barras; Automação e robotização; Informatização dos resultados; Sistemas modulares; Programa de CQ. Processo Laboratorial 70% dos erros laboratoriais Maior controle de qualidade (POPs, amostras controle) Modelo de POP de Bioquímica Apesar do crescente avanço tecnológico na área de análises clínicas, não é possível eliminar todas as possíveis interferências. Entretanto, é importante conhecê-las para evitar falsas interpretações. As orientações de coleta devem ser realizadas ainda no consultório médico, com a participação ativa do clínico (ex: jejum, dieta, suspensão das atividades físicas, relato dos medicamentos utilizados,...). O laboratório também deve fornecer essas informações e confirmar o preparo antes da coleta. Fatores que devem ser informados antes da coleta Gênero, ex: creatinina; Idade ex: LDH; Jejum *A maioria dos exames exige três horas de jejum, com exceção da glicemia (oito horas) e do perfil lipídico (12 horas); Álcool e fumo, ex: GGT; Medicamentos em uso, ex: furosemida e COL e TRI; Atividade física, ex: CK. Técnicas de coleta de amostras biológicas para exames bioquímicos Coleta de sangue para exames bioquímicos Tubos: vidro ou plástico com vácuo calibrados, validade, volume para cada frasco; Aditivos no tubo: ativadores de coágulo e gel separador (p/soro) e anticoagulantes (p/plasma); Técnicas: à vácuo (maior segurança, coleta múltipla, proporção sangue aditivo ); Homogeneização: inversões do tubo 5x-8x; Tempo garroteamento: máx. 2 min; Não coletar onde ocorreu infusão de medicamentos. Identificação tubos! Soro e plasma: Fração do sangue rica em proteínas e sais (solução aquosa). não contém fibrinogênio contém fibrinogênio Interferências comuns Hemólise Lipemia Coágulos Microcoágulos Icterícia Outros materiais Urina isolada: recente, 2h sem urinar, frasco coletor estéril, temperatura e refrigeração (depende do teste). Urina 24h: coleta durante 24h, frasco coletor 2L, refrigerado e protegido da luz, uso de conservante (depende do teste). Sangue arterial: coleta em seringa heparinizada, sem bolhas ou coágulos. Outros líquidos (cefalorraquidiano, ascítico, pleural e sinovial): entrega imediata ou refrigeração. Frasco de Líquor Urina isolada Urina de 24h Seringa de gasometria Métodos e Técnicas Utilizados em Bioquímica Clínica Química Líquida Metodologia: espectrofotometria; Necessita de água deionizada; Reagentes líquidos individualizados; Amostra incubada (temperatura e tempo) com os reagentes; Leitura no espectrofotômetro (manual ou automatizado); Resultado: densidade ótica (absorbância) comparada ao padrão do kit, cálculo manual ou automático; Gera resíduos líquidos. Espectrofotometria: mede e compara a quantidade de luz que uma substância absorve. comprimentos de onda individuais (ex: 505 nm glicose) A porção de luz que passa pela solução corada é detectada por uma célula fotoelétrica. Essa luz é o percentual de transmitância (%T). A luz que não passa pela solução por ser absorvida por ela é medida em unidades de absorbância (A). Reações Colorimétricas Medem a energia radiante transmitida/absorvida na faixa do visível; 400 a 680 nm; produto de análise colorido; ex: colesterol, glicose,... Reações Ultravioleta Medem a energia radiante transmitida/absorvida na faixa de luz ultravioleta; 340 a 365 nm; produto de análise incolor; ex: TGO, TGP,... Métodos e Técnicas Utilizados em Bioquímica Clínica Química Líquida Metodologia: eletrodo íon seletivo; Eletrodos individualizados (sódio, potássio, cloro, cálcio iônico, lítio); A diferença entre a concentração de íons do eletrodo de referência e os íons detectados na amostra biológica geram um potencial elétrico (voltagem). Essa voltagem será convertida na concentração de íons da amostra biológica. Métodos e Técnicas Utilizados em Bioquímica Clínica Química Seca Metodologia: reflectância; Reação química da luz, a qual incide diretamente no fundo do slide e é transformada em leitura de voltagem que gera o resultado da análise. Não necessita de água deionizada, não gera resíduos líquidos; Reagentes prontos para uso em Microslides; Filtragem de proteínas e lipídeos (redução da interferência de hemólise, lipemia e bilirrubina). Aquisição e Interpretação de Dados Bioquímicos Interpretação de Dados Bioquímicos Valor de referência; Sensibilidade: é a probabilidade de um resultado positivo em pacientes nos quais a doença está presente, também chamado de verdadeiro positivo; Especificidade: é a probabilidade de um resultado negativo em pacientes que não têm a doença, também chamado de verdadeiro negativo. Falsos (+) ou (-): podem ser minimizados utilizando-se a com binação de testes. Acurácia: proporção de acertos (% de verdadeiros positivos + verdadeiros negativos) Exemplo Teste HIV sensibilidade 100% Todas as etapas do processo analítico (pré-analítico, analítico e pós-analítico) precisam ser controladas: Infraestrutura, capacitações de equipes, equipamentos, reagentes, métodos, documentação, limpeza, descarte de resíduos, ... Controle de Qualidade (interno/externo): técnicas e atividades operacionais que se destinam a monitorar um processo para eliminar falhas; Garantia da Qualidade: atividades planejadas e sistemáticas para promover os requisitos da qualidade. Aspectos da Qualidade Avaliação Laboratorial da Função Renal Função renal: excreção (excesso, subst. estranhas), reabsorção de substâncias e produção de hormônios. Doenças renais: problema de saúde pública, podem comprometer de 50 a 75% do órgão antes de originar sintomas; Principais Exames Bioquímicos: creatinina, ureia, proteinúria e microalbuminúria. Outros: EQU. Néfron: unidade filtrante dos rins. Determinação Laboratorial da Creatinina Paciente: evitar exercício excessivo 8h antes do teste, evitar ingestão excessiva de carne vermelha 24 h antes do teste. Amostra: Soro, plasma heparinizado, urina de 24h. Interferências: falsos elevados (antimicrobianos como cefalotina, trimetoprima; AAS,...) Método: mais comum enzimático com medida espectrofotométrica. VR adultos(sangue): Homens 0,6 a 1,2 mg/dL, Mulheres 0,6 a 1,1 mg/dL. VR adultos(urina): Homens 14 a 26 mg/kg/dL, Mulheres 11 a 20 mg/kg/dL. Pré-renal: Necrose muscular esquelética (traumatismos, distrofias,..) Insuficiência cardíaca congestiva, choque, depleção de sais e água,.. Renal (insuficiência renal agudaou crônica) Pós-renal: Hipertrofia prostática Compressões dos ureteres Cálculos e anormalidades congênitas Hipercreatinemia Depuração da Creatinina Endógena (DCE) Avalia a taxa de filtração glomerular. Amostras: soro ou plasma heparinizado e urina de 24h. Ureia É um produto do metabolismo proteico (dieta, degradação muscular e degradação/reciclagem proteínas). É utilizada na avaliação da insuficiência renal. Amostra: Soro e plasma heparinizado. Interferências: falsos aumentados c/ uso de captopril, nitrofurantoína, abuso de álcool, cirrose, desnutrição hepática, hepatite,... Método: mais comum enzimático com medida espectrofotométrica. VR adultos: 15-39 mg/dL. Pré-renal (perfusão inadequada dos rins): Insuficiência cardíaca, choque, hemorragia,.. Tratamento com cortisol ou derivados sintéticos Dieta rica em proteínas, febre, estresse,.. Renal (insuficiência renal aguda ou crônica) Pós-renal (obstrução do trato urinário): Obstrução uretral (cálculos, coágulos, tumores,..) Obstrução na saída da bexiga Hiperuremia Insuficiência hepática; Dieta pobre em proteínas; Desnutrição; Hiper-hidratação; Síndrome da secreção inadequada do hormônio antidiurético (vasopressina) à aumenta a retenção de água. Hiporuremia Adami, E.; Stevan, F.R.; Lima, T. S. Cruzeiro do Sul. Bioquímica Clínica. Introdução à Bioquímica Clínica e Marcadores Laboratoriais da Função Renal. Motta, V. T. Bioquímica Clínica para o Laboratório, 5ª edição, 2009. Referências