resumos Biologia Molecular

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Slide 11 Bio Mol
Tipagem genética
Tipagem genética (técnicas)-sequenciação:
 Sequência do Tipo Selvagem (Wild Type): Representa a sequência de DNA considerada padrão ou normal.
Homozigoto: Indica que a amostra possui duas cópias idênticas de um gene específico.
Heterozigoto: Refere-se a uma amostra com duas cópias diferentes de um gene.
· Três gráficos de eletroferograma – representam os resultados de sequenciamento de DNA. 
· Cada gráfico está rotulado com números de amostra diferente e anotações que indicam se a amostra é uma sequência do tipo selvagem, homozigota ou heterozigota;
· Os gráficos mostram os picos em várias cores correspondentes aos nucleótidos de adenina (A), citosina (C), guanina (G), timina (T). 
· Demonstra como a tipagem genética pode diferenciar entre vários genótipos ao comparar sequências de DNA
A microscopia confocal é uma técnica para obter imagens de alta resolução de espécies biológicas.
FMNL2/3 KO #46/20: Pode representar uma amostra onde os genes FMNL2 e FMNL3 foram desativados (knockout), e a fluorescência indica a localização de outra proteína ou marcador.
GM130: É uma proteína associada ao complexo de Golgi, e a ausência de fluorescência pode sugerir que a proteína não está presente ou não foi marcada na amostra.
· Sondas e marcadores moleculares” discute a co-localização usando microscopia confocal e localização.
· representa visualmente como marcadores moleculares específicos podem ser usados para identificar diferentes organelos dentro de uma célula, como o aparelho de Golgi ou mitocôndrias, através de marcação fluorescente
Imunofluorescência direta e indiretaImunofluorescência Direta:
Processo: Um anticorpo primário, que reconhece o antígeno de interesse, é marcado diretamente com um fluoróforo.
Aplicação: Permite a visualização direta do complexo anticorpo-antígeno sob um microscópio de fluorescência.
Vantagem: Método rápido, pois requer apenas um passo de ligação
Imunofluorescência Indireta:
Processo: Um anticorpo primário não marcado liga se ao antigénio, seguido por um anticorpo secundário marcado com fluoróforo que se liga ao primário.
Aplicação: Utilizado para amplificar o sinal de fluorescência, permitindo uma deteção mais sensível.
Vantagem: Maior flexibilidade e sensibilidade devido à amplificação do sinal.
· técnica pode ser usada para identificar proteínas específicas de células cancerígenas, o que é útil para diagnósticos médicos e pesquisas.
· O DNA recombinante é uma molécula de DNA que foi geneticamente modificada para incluir uma sequência de interesse. Neste caso, a sequência de interesse codifica uma proteína favorita que está ligada à GFP (Green Fluorescent Protein).
· Objetivo: O DNA recombinante é introduzido em células para que a sequência de interesse seja expressa.
· DNA -> RNA, Durante a transcrição, a sequência de DNA é copiada para formar uma molécula de RNA mensageiro (mRNA).
· Enzima: A RNA polimerase é a enzima responsável por esse processo.
RNA -> Proteína (tradução)
· O mRNA é utilizado como molde para sintetizar a proteína. Os ribossomos leem a sequência do mRNA e traduzem-na em uma cadeia de aminoácidos, formando a proteína.
· Componentes envolvidos: Ribossomos, tRNAs (RNA de transferência), e diversos fatores de tradução.
Proteína Favorita Ligada à GFP:
A proteína de interesse (favorita) é geneticamente fusionada à GFP. A GFP é um marcador molecular que emite fluorescência verde quando exposta à luz ultravioleta.
Objetivo: A fusão com a GFP permite a visualização e localização da proteína dentro das células usando técnicas de fluorescência, facilitando estudos de expressão e localização subcelular da proteína.
Processo:
1. Inserção do DNA recombinante na célula.
2. Transcrição do DNA recombinante para formar mRNA.
3. Tradução do mRNA em uma proteína de fusão que contém a proteína favorita e a GFP.
4. Detecção da proteína de fusão graças à fluorescência da GFP, permitindo estudos funcionais e de localização.
· Indica que o DNA da Proteína Fluorescente Verde (GFP) é fundido com o DNA de outra proteína escolhida por um indivíduo.
· No centro, há uma seta a apontar do DNA recombinado para o RNA e depois para a proteína, indicando o processo que ocorre dentro de uma célula
· O GFP está ligado a uma extremidade da proteína.
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